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大鼠5羥色胺2B(5-HT2B)elisa試劑盒目的:大鼠3α-HSD[EC1.1.1.50]具有二氫二醇脫氫酶活性,利用該酶可對血 清中的總膽汁酸含量進行檢測。為獲得3α-HSD高表達工程菌株,也為開發(fā)3α-HSD 的臨床應(yīng)用提供資料,本文對大鼠3α-HSD cDNA進行了克隆、表達及表達產(chǎn)物 的純化,并初步對純化獲得的重組3α-HSD的酶活性進行初步觀察。 方法:1、提取大鼠總RNA,通過RT-PCR獲得全長的3α-HSD cDNA,并測序鑒 定;2、將3α-HSD cDNA克隆于pET-30a-c(+)載體,形成原核融合表達質(zhì)粒 pET-30a-c(+)/3α-HSD cDNA,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)pLysS;3、采用不同濃度IPTG、 不同誘導時間、不同溫度優(yōu)化選擇pET-30a-c(+)/3α-HSD cDNA轉(zhuǎn)化菌誘導表達融 合蛋白的條件;4、采用His-Bind Resin親和層析純化重組表達的融合蛋白;5、 檢測pET-30a-c(+)/3α-HSD融合蛋白的3α-HSD活性。 結(jié)果與討論:1、由提取的總RNA有較好的完整性和較高的純度,紫外分光光度 法定量測得樣品中RNA含量為2.88μg/μl。


大鼠5羥色胺2B(5-HT2B)elisa試劑盒目的:探討黃芩苷抑制腦缺血- 再灌注損傷的作用機制。方法:線栓法制作大腦中動脈缺血-再灌注大鼠模型。應(yīng)用RT-PCR、Western-blot以及酶免疫測定方法,觀察黃芩苷對 環(huán)氧化物酶-2(COX-2)、5-脂加氧酶(5-LOX)及其代謝產(chǎn)物前列腺素E2(PGE2)和半胱氨酸白三烯(cys-LT)的影響。使用聚丙烯酰 胺凝膠電泳檢測腦組織清蛋白含量,評價黃芩苷對腦缺血-再灌時血腦屏障的影響。結(jié)果:①黃芩苷降低腦缺血-再灌注時組織細胞質(zhì)內(nèi)5-LOX的含量 (P0.01),抑制cys-LT的合成(P0.01)。②黃芩苷減輕缺血-再灌注損傷時血腦屏障破壞導致的清蛋白滲出(P0.05)。


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