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蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒
蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒
品牌:原鑫生物
貨號(hào):YX-152875
規(guī)格:60T/50S
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蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒

Sucrose Synthase (SS) Activity Assay Kit

蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒圖1

一、蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品描述 

蔗糖不僅是重要的光合產(chǎn)物,也是植物體內(nèi)運(yùn)輸?shù)闹饕镔|(zhì)、碳水化合物的貯存形式之一。蔗糖 合成酶(Sucrose Synthase,SS)是植物糖代謝過(guò)程的關(guān)鍵酶,負(fù)責(zé)催化蔗糖合成與分解的可逆反應(yīng), 其合成活性可催化植物體內(nèi)游離果糖和葡萄糖生成蔗糖。

蔗糖合成酶催化游離果糖與葡萄糖供體 UDPG 反應(yīng)生成蔗糖,蔗糖與間苯二酚反應(yīng)生成有色物 質(zhì),產(chǎn)物在 480 nm 處具有特征吸收峰,通過(guò)吸光值變化即可表征蔗糖合成酶的活性。

蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒圖2

蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒圖3


二、蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品使用說(shuō)明

測(cè)定過(guò)程中所需要的儀器和試劑:可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL 玻璃比色皿、研缽/勻漿器、可調(diào)式移 液器、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。

1.粗酶液的制備(可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果適當(dāng)調(diào)整樣本量及比例) 

按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:(5-10)的比例(建議稱取 0.1 g 組織,加入 1 mL 提取液)處理樣品,冰浴勻漿,4℃ 8000 g 離心 10 min,取上清即為粗酶液,置于冰上待測(cè)。

2.測(cè)定步驟

①分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 480 nm,蒸餾水調(diào)零。

②滅活粗酶液的制備:取適量粗酶液沸水浴處理 5-10 min(密封以防止水分散失),冷卻至室溫 后即為滅活粗酶液,可將待測(cè)粗酶液統(tǒng)一進(jìn)行處理。

③在離心管中依次加入下列試劑:

蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒圖4

充分混勻,25℃準(zhǔn)確反應(yīng) 10 min

蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒圖5

充分混勻,沸水浴處理 10 min(密封以防止水分散失)

冰水浴迅速冷卻至室溫

蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒圖6

吸光值測(cè)定(30 min 內(nèi)完成測(cè)定):取 1 mL 反應(yīng)液至 1 mL 玻璃比色皿中,測(cè)定 480 nm 處吸光 值,記為 A 測(cè)定、A 對(duì)照、A 標(biāo)準(zhǔn)和 A 空白,計(jì)算?A 測(cè)定=A 測(cè)定-A 對(duì)照,?A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空 白。注:空白管只需測(cè)定 1-2 次,每個(gè)測(cè)定管均需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:以 3.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125 mg/mL 為橫坐標(biāo)(x),以其對(duì)應(yīng)的?A 標(biāo)準(zhǔn) 為縱坐標(biāo)(y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b,將?A 測(cè)定帶入公式中得到 x(mg/mL)。

3.蔗糖合成酶(SS)活性計(jì)算 

①按組織蛋白濃度計(jì)算

單位定義:每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。

蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒圖7

②按組織樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義:每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1 μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。

蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒圖8

注釋:V 樣:反應(yīng)體系中加入粗酶液的體積,0.03 mL;V 提:粗酶液總體積,1 mL;Cpr:樣本 蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,10 min。


三、蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng) 

①若測(cè)定吸光值超出標(biāo)準(zhǔn)線性吸光值范圍:高于最高值建議將粗酶液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定;低 于最低值建議適當(dāng)增加樣本量重新制備粗酶液后再進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算時(shí)相應(yīng)修改;

②顯色完成后應(yīng)在 30 min 內(nèi)完成測(cè)定; ③為保證結(jié)果準(zhǔn)確且避免試劑損失,測(cè)定前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(以實(shí)際收到說(shuō)明書內(nèi)容為準(zhǔn)), 確認(rèn)試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備是否充分,操作步驟是否清楚,且務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)測(cè)定, 過(guò)程中問(wèn)題請(qǐng)您及時(shí)與上海原鑫生物科技工作人員聯(lián)系。


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