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| 植物中脂氧合酶（LOX）活性檢測試劑盒 |
 品牌：原鑫生物
貨號：AUKT-85559
規(guī)格：70T/50S
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植物中脂氧合酶（LOX）活性檢測試劑盒 Plant Lipoxidase (LOX) Activity Assay Kit 一、產(chǎn)品描述 脂氧合酶（LOX）是一種廣泛存在于植物中含非血紅素鐵的氧化還原酶，作為植物十八碳酸代謝 途徑的關(guān)鍵酶，能夠?qū)Ｒ恍源呋嘣伙柡椭舅岬募友醴磻?yīng)，生成具有共軛雙鍵的過氧化氫物，直 接或間接參與植物的生長、發(fā)育、成熟和衰老的調(diào)控過程，對植物生長發(fā)育及對環(huán)境脅迫的反應(yīng)具有 重要的影響。 脂氧合酶能夠催化亞油酸氧化，產(chǎn)物在 234 nm 處具有特征吸收峰，通過吸光值的變化速率即可 表征脂氧合酶的活性。
二、產(chǎn)品內(nèi)容
注：試劑二瓶內(nèi)含棕色離心管，取 0.5 mL 試劑一將離心管中固體充分溶解后洗入棕色瓶中即可。
三、產(chǎn)品使用說明
測定過程中所需要的儀器和試劑：紫外分光光度計、1 mL 石英比色皿（光徑 10 mm）、研缽/勻 漿器、可調(diào)式移液器、臺式離心機、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。 1.植物中脂氧合酶（LOX）的提取（可根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果適當(dāng)調(diào)整樣本量及比例）
按照樣本質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1：（5-10）的比例（建議稱取 0.1 g 組織，加入 1 mL 提取液）處理樣品，冰浴研磨至勻漿（或?qū)颖臼褂靡旱心ズ蠹尤胩崛∫夯旌暇鶆颍?℃ 15000 g 離心 20 min，取上清即為粗酶液，置于冰上待測。
2. 測定步驟
①紫外分光光度計預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長至 234 nm，蒸餾水調(diào)零。 ②試驗前將試劑一 25℃預(yù)熱 30 min 以上。 ③在 1 mL 石英比色皿中依次加入下列試劑： 
吸光值測定：①迅速混勻并開始計時，測定 15 s 時 234 nm 處吸光值，記為 A1 測定和 A1 空白； ②測定 75 s 時 234 nm 處吸光值，記為 A2 測定和 A2 空白；③計算?A 測定=A2 測定-A1 測定，?A 空 白=A2 空白-A1 空白，?A=?A 測定-?A 空白。注：空白組只需測定 1-2 次。
3.脂氧合酶（LOX）活性計算
注釋：V 樣：反應(yīng)體系中加入粗酶液的體積，0.1 mL；V 樣總：粗酶液總體積，1 mL；V 反總： 反應(yīng)體系總體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，60 s=1 min； ?A=?A 測定-?A 空白。
四、注意事項
①提取和測定過程均需在冰上進行以免酶失活，粗酶液制備完成后需當(dāng)日完成測定； ②本方法采用速率法測定酶活：準確在規(guī)定時間點完成吸光值測定，以保證實驗結(jié)果的準確性； ③若 A2 測定＞2.5 或?A＞1.2，建議將粗酶液使用試劑一稀釋后再進行測定，計算時相應(yīng)修改； ④為保證結(jié)果準確且避免試劑損失，測定前請仔細閱讀說明書（以實際收到說明書內(nèi)容為準）， 確認試劑儲存和準備是否充分，操作步驟是否清楚，且務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本進行預(yù)測定， 過程中問題請您及時與工作人員聯(lián)系。
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