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谷氨酸(Glu)含量的檢測方法

谷氨酸(Glu)含量的檢測方法多種多樣,主要包括以下幾種:


1. 紫外分光光度法

紫外分光光度法是通過谷氨酸脫氫酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+,隨后NADH在340nm處產生吸光度變化來計算谷氨酸含量。具體步驟包括:

試劑準備:將試劑一解凍至室溫或水浴預熱5-15分鐘。

樣品處理:根據樣本類型(如組織、細胞、血清等),按比例加入試劑一進行冰浴勻漿,離心后取上清液。

測定:使用紫外分光光度計在340nm波長下測定吸光度變化,通過公式計算谷氨酸含量。


2. 比色法(WST法)

比色法基于谷氨酸脫氫酶催化谷氨酸與NADH反應生成NADH,后者在450nm處產生最大吸收峰。具體步驟如下:

試劑準備:將試劑一和試劑二按比例混合后加入樣本中。

測定:使用分光光度計在450nm波長下測定吸光度變化,通過公式計算谷氨酸含量。


3. 微量法

微量法適用于小樣本量的檢測,通常結合酶標儀或分光光度計進行操作:

試劑準備:將試劑一和試劑二按比例混合后加入樣本中。

測定:在特定波長(如570nm或340nm)下測定吸光度變化,通過公式計算谷氨酸含量。


4. 高效液相色譜法(HPLC)

HPLC法通過柱前衍生化技術將谷氨酸轉化為可檢測的衍生物,適用于復雜樣品的定量分析:


試劑準備:使用鄰苯二甲醛(OPA)作為衍生試劑。

測定:通過色譜柱分離谷氨酸衍生物,并在特定波長下檢測其濃度。


5. 磁共振成像技術(MRS)

MRS技術通過檢測谷氨酸與自由水之間的化學交換信號來定量分析谷氨酸含量:

原理:利用磁共振化學交換飽和轉移(CEST)技術,通過非對稱分析方程式計算谷氨酸濃度。


6. 其他方法

電化學傳感器:基于納米線電極或碳基材料的電流變化來檢測谷氨酸。

熒光光譜法:通過熒光探針檢測谷氨酸的熒光信號變化。


注意事項

樣本處理:不同樣本類型(如組織、細胞、血清等)需根據說明書進行勻漿、離心等預處理。

儀器校準:使用標準曲線校準儀器,確保測定結果的準確性。

試劑保存:大部分試劑需冷藏保存(如-20℃或4℃),并注意有效期。

谷氨酸含量的檢測方法多樣,選擇適合的檢測方法需根據樣本類型、實驗條件及靈敏度要求等因素綜合考慮。


 

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