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氧化與抗氧化 - 黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒說明書

黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒說明書

黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒

黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒配圖


一、黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒產(chǎn)品描述 

黃嘌呤氧化酶(XOD)是生物體內(nèi)核酸代謝過程中的關(guān)鍵氧化還原酶類,可以利用分子氧作為電 子受體或亞甲基藍(lán)、苯醌、高鐵氰化物和硝酸鹽等人工電子受體催化氧化黃嘌呤、蝶呤和醛類等多種 雜環(huán)化合物,并伴隨產(chǎn)生過氧化氫和超氧自由基等活性氧,具有重要的生理和病理功能,在高尿酸血 癥的診斷、活性氧生理作用和氧化應(yīng)激損傷等研究領(lǐng)域具有重要作用。 黃嘌呤氧化酶能夠催化黃嘌呤產(chǎn)生尿酸,產(chǎn)物在 290 nm 處具有特征吸收峰,通過吸光值變化即 可表征黃嘌呤氧化酶的活性。


二、黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒產(chǎn)品內(nèi)容圖示

黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒圖1


三、黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒產(chǎn)品使用說明

測定過程中所需要的儀器和試劑:紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿(光徑 10 mm)/96 孔 UV 板、研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器/多道移液器、臺式離心機(jī)、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。

①組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:(5-10)的比例(建議稱取 0.1 g 組織,加 入 1 mL 提取液)處理樣品,冰浴勻漿,4℃ 8000 g 離心 10 min,取上清置于冰上待測。 

②細(xì)菌或細(xì)胞:離心收集細(xì)菌或細(xì)胞至離心管內(nèi),按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL) 為(500-1000):1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1 mL 提取液)處理樣品,冰浴超聲破碎(功 率 20%或 200 W,超聲 3 s,間隔 10 s,重復(fù) 30 次),4℃ 8000 g 離心 10 min,取上清置于冰上待測。 

③血清(漿)、培養(yǎng)液等液體樣本:直接檢測或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行檢測。


黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒測定步驟:

①分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長至 290 nm,蒸餾水調(diào)零。 

②根據(jù)使用量取出適量 XOD 工作液 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 20 min 以上。 

③在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中依次加入下列試劑:

吸光值測定:①立即混勻并開始計(jì)時(shí),測定 290 nm 處初始吸光值,記為 A1 測定和 A1 空白;② 測定 60 s 時(shí) 290 nm 處吸光值,記為 A2 測定和 A2 空白;③計(jì)算?A 測定=A2 測定-A1 測定,?A 空 白=A2 空白-A1 空白,?A=?A 測定-?A 空白。注:空白組只需測定 1-2 次。


黃嘌呤氧化酶(XOD)活性計(jì)算圖示

黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒圖2

黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒使用 96 孔 UV 板進(jìn)行測定的計(jì)算公式圖示:

黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒圖3

注釋:V 反總:反應(yīng)體系總體積,2.1×10-4 L;ε:尿酸摩爾消光系數(shù),1.22×104 L/mol/cm;d1:微 量石英比色皿光徑,1 cm;d2:96 孔 UV 板光徑,0.5 cm;V 樣:反應(yīng)體系中加入粗酶液的體積,0.01 mL;V 樣總:粗酶液總體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃 度,mg/mL;細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),以萬計(jì)。


四、黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒注意事項(xiàng)

 ①若 ΔA 測定大于 0.5 或 A1 測定大于 1.0 時(shí),建議將粗酶液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定,計(jì)算時(shí)相 應(yīng)修改; ②若使用 96 孔 UV 板進(jìn)行檢測時(shí)應(yīng)使用多道移液器且分批進(jìn)行,以確保組間反應(yīng)時(shí)間一致; ③為保證結(jié)果準(zhǔn)確且避免試劑損失,測定前請仔細(xì)閱讀說明書(以實(shí)際收到說明書內(nèi)容為準(zhǔn))。


產(chǎn)品鏈接:http://www.gjtszl.cn/products-206.html

文章來源:http://www.gjtszl.cn/newss-140.html

 

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