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土壤纖維素酶(S-CL)活性檢測試劑盒說明書

土壤纖維素酶(S-CL)活性檢測試劑盒

Soil Cellulase (S-CL) Activity Assay Kit

一、土壤纖維素酶(S-CL)活性檢測試劑盒產品描述

土壤纖維素酶(S-CL)主要來源于土壤微生物,催化秸稈纖維中 β-1,4-葡萄糖苷鍵,使其轉變為 纖維二糖和葡萄糖,產物為微生物可優先利用的碳源營養物質,在土壤碳素代謝中起著重要的作用。

土壤纖維素酶可催化纖維素降解產生還原糖,進一步與 3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基 化合物,產物在 540 nm 處具有特征吸收峰,通過吸光值的變化即可表征土壤纖維素酶的活性。 


二、土壤纖維素酶(S-CL)活性檢測試劑盒產品內容

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三、土壤纖維素酶(S-CL)活性檢測試劑盒產品說明

測定過程中所需要的儀器和試劑:可見分光光度計、1 mL 玻璃比色皿、可調式移液器、恒溫水 浴/培養箱、烘箱、30-50 目篩、甲苯和蒸餾水。

1. 土壤樣本的處理

新鮮土樣自然風干或 37℃烘箱風干,過 30-50 目篩。

2. 測定步驟

①分光光度計預熱 30 min 以上,調節波長至 540 nm,蒸餾水調零。

②在離心管中依次加入下列試劑(可根據預實驗結果適當調整樣本量):

測定管振蕩混勻,室溫放置 15 min

對照管沸水浴處理 15 min(密封以防止水分散失)

振蕩混勻,40℃水浴糖化 1 h,

沸水浴處理 15 min(密封以防止水分散失),即為糖化液

沸水浴顯色 15 min(密封以防止水分散失),冷卻至室溫

吸光值測定:測定 540 nm 處吸光值,記為 A 測定、A 對照、A 標準和 A 空白;計算?A 測定=A 測定-A 對照,?A 標準=A 標準-A 空白。注:每個測定管均需設一個對照管,空白管只需測定 1-2 次。

標準曲線的建立:以 2.0、1.5、1.0、0.5、0.25、0.125 mg/mL 為橫坐標(x),以其對應的?A 標準 為縱坐標(y),繪制標準曲線,得到線性回歸方程 y=kx+b,將?A 測定帶入公式中得到 x(mg/mL)。 

1. 土壤纖維素酶(S-CL)活性計算

單位定義:每天每 g 土樣中產生 1 mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

注釋:V 反總:反應體系總體積:1.625 mL;T:反應時間,1 h=1/24 d;W:樣本質量,0.25 g。


四、土壤纖維素酶(S-CL)活性檢測試劑盒產品注意事項

①若?A 測定超出標準線性吸光值范圍,超出最高值可將糖化液適當稀釋后再進行測定,低于最 低值可適當延長糖化時間,計算時相應修改;

②為保證結果準確且避免試劑損失,測定前請仔細閱讀說明書(以實際收到說明書內容為準), 確認試劑儲存和準備是否充分,操作步驟是否清楚,且務必取2-3個預期差異較大的樣本進行預測定, 過程中問題請您及時與工作人員聯系。



 

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